jueves, 12 de junio de 2008

12 de Junio de 2008 - Quinta semana de pasantía

Esta semana seguimos lo que habíamos hecho en la anterior. Ahora era tiempo de comprobar si la PCR había salido bien como lo planeamos, para lo cual realizamos una electroforesis. Preparamos el gel de agarosa 1.5% (con 0,75g de agarosa y 50 ml de EDTA), y le incorporamos el bromuro de etilio (tuvimos especialmente precaución con el BrEt ya que es cancerigeno) lo pusimos en la cuba , marcamos las calles y lo dejamos secar.
Mientras tanto, a las muestras que obtuvimos de la PCR (que fueron congeladas desde la semana anterior) le agregamos el buffer de siembra con un colorante naranja (3 µ). Una vez más, con todo listo y el gel ya gelificado, sembramos las muestras, un blanco y el marcador de 50pb obteniendo mejores resultados, a diferencia de la primera vez, a la hora de sembrar y corrimos el gel a 100 ev.

Como la electroforesis iba a tardar un buen tiempo, decidimos bajar a las computadoras del segundo piso y navegar por Internet, donde nuestro investigador nos recomendó algunas páginas a partir de las cuales íbamos a poder comenzar a preparar la introducción acerca del proyecto.

Cuando volvimos al tercer piso, las muestras ya habían corrido perfectamente, con lo cual desconectamos la cuba y con precaución nos dirigimos a la habitación de PCR, donde pudimos observar los resultados con luz ultravioleta y sacarle una foto al gel (vale tener en cuenta que se veía más nítida, pero como es una foto se ve más borrosa).

(Gracias al marcador de PM se puede definir a simple vista el peso (en pb, pares de bases) aproximado del fragmento de ADN obtenido por medio de la PCR. Al saber el tamaño que el mismo debía tener, ya que estaba como condicion en el diseño del primer, pudimos verificar a través de la electroforesis que la PCR salió como lo esperábamos)