5 de Junio de 2008 - Cuarta semana de pasantía

Luego de haber aprendido a calcular concentraciones la semana anterior, esta vez lo hicimos pero en la practica. Realizamos una PCR de las muestras para amplificar el gen GSTPi-I104V, cuya función es inactivar drogas y eliminarlas del organismo.
Primero que nada calculamos, para llevar a un volumen final de 15 microlitros, los volúmenes necesarios de buffer, de MgCl2, de dNTPs, de los Primer reverse y forward (iguales cantidades), de la enzima Taq polimerasa, de cada uno de los ADN y para llevar a volumen completamos con H2O.
Como cada muestra por separado lleva iguales compuestos e iguales cantidades de los mismos, para reducir el error, preparamos un Master Mix (se multiplican las cantidades finales por la cantidad de muestras a tratar) y a partir de este pipeteamos cantidades iguales en los eppendorf, a los cuales por ultimo le agregamos las distintas muestras de ADN. Paralelamente realizamos un control negativo, al cual en vez de ADN, se lo trata con H2Od (como el primer no se pega y no hay PCR, la electroforesis no debe mostrar resultados, si sí, significa que algo interfirió en las reacciones con lo cual los resultados pueden ser erróneos.)
Teniendo todo listo y preparado, colocamos los eppendorf en la maquina de PCR (Multigene Labnet), la programamos (especificando las temperaturas de cada paso y la cantidad de ciclos a repetirse) y esperamos a que finalice el proceso.
Como teníamos tiempo de sobra, hicimos algunas soluciones junto con Javier (pertenecientes a un protocolo para la extracción de ADN plasmídico). Así que calculamos cantidades y ¡manos a la obra!

Hasta luego, los saluda Ayelén y Solange!