22 de Mayo de 2008 - Segunda semana de pasantía

En nuestro segundo día de pasantía. Nos encontramos en las mesas del bar que está al lado del laboratorio, desayunamos y esperamos a que llegue nuestro investigador. Al rato de que entramos en el LAB nos contó que íbamos a hacer una extracción de ADN. Teníamos muestras congeladas de sangre que pertenecían a cuatro pacientes diferentes. Básicamente, nos contó que había dos maneras de realizar la extracción. La primera, se realizaba utilizando un kit que contiene la mayoría de los elementos necesarios para la extracción de ADN tales como, las soluciones Buffer, los tubos y las columnas con sus correspondientes filtradores. La segunda opción es muy similar a la primera, pero manual. Una de las diferencias es que cuando tengo la muestra, es necesario lavarla, o sea sacar los glóbulos rojos que pueden interferir en las reacciones posteriores. La extracción se realiza con un solvente orgánico, inmiscible. Nosotros empleamos el primer método. Datos del Kit: QIAamp DNA Blood Midi Kit (20) Cat. Nº 51183 LOT Nº 127142648 Al finalizar la experiencia, necesitábamos comprobar si el ADN estaba en condiciones para ser utilizado más tarde, o sea si no contenía impurezas, como proteínas, ó que no esté degradado, ya que cuando se saca una célula del organismo, se descompone y en consecuencia el ADN comienza a destruirse. Para comprobar todo lo anteriormente dicho hay dos maneras: Hacer una espectroforesis, utilizando gel de azarosa. Si el ADN está degradado, deja una banda corrida naranja. Si esta en trozos pequeños, los mismos quedan en la parte de abajo, ya que corren más por ser menos densos y poder pasar más fácilmente por los poros. Mediante una espectroforesis, se puede medir la absorbancia de: Los nucleótidos que forman el ADN, a una lamda de 260 nanometros, que es cuando más absorben. Las proteínas, a una lamda de 280 nm. Se hace una relación de absorbancia, 260/280, si la absorbancia da un valor menor a 1.5 no es aceptable, o sea que la muestra de ADN no es lo suficientemente pura. Optamos por la espectroforesis. Preparamos el gel de agarosa (50ml de TAE 1X + 0.5 g del gel + 3 microlitros de bromuro de etilo) y lo colocamos en la cuba, para que seque. No tuvimos el tiempo necesario para poder finalizar la experiencia y poder ver los resultados, con lo cual Javier lo realizará en la semana, lo fotografiará y nos mostrará los resultados obtenidos. (Durante el año realizaremos en varias oportunidades el mismo experimento).