26 de junio - 7mo día de pasantía

Una vez más en el laboratorio, continuamos lo que habiamos hecho la semana pasada. Realizamos una electroforesis en gel de agarosa 1.5%. El objetivo de la misma era comprobar si la PCR de la semana pasada habia salido bien.


Miestras dejabamos correr las muestras Paola, otra investigadora que trabaja en el laboratorio, nos conto un poco acerca de lo que hacia, que investigaba y nos explico sobre las lineas celulares, que tipo de crecimiento tienen, lo cual pudimos ver en el microscopio invertido ( la lente se situa por debajo de donde se apoya la muestra a examinar) .


Luego de que la corrida habia terminado, procedimos a ver con luz UV las bandas que se formaron y pudimos deducir que como dos de muestras tenian bandas más débiles debiamos usar de los mismo un poco mas de cada uno. Ahora pasamos a preparar las muestras para que sean tratadas con enzimas de restricción. Calculamos las cantidades de cada reactivo ( de producto de PCR, de H2O, de Buffer 10x y de encimas ECO 130I ). En esta parte tuvimos que hacer una pequeña modificación por el detalle que les contamos antes, con lo cual al momento de calcular la cantidad de producto de PCR que habia que utilizar para la digestión con ennzimas, tuvimos que agregar 5 ml más esas, con lo cual el volumen de agua a agregar para llevar a volumen final era distinto. A causa de esto, al momento de preparar la Master Mix tomamos el volumen menor de agua, y luego agregariamos la diferencia.


Como la incubación es overnight, lo que significa que se deja toda la noche con las enzimas, Javier dejó las muestras a 37 ºC para que se realice la digestión y luego se congelarian para que la semana que viene pudiesemos seguir trabajando con las mismas.